核酸檢測幕后:樣本滅活需56℃水浴30分鐘

核酸檢測呈陽性，表明又一名新冠肺炎患者確診。2月11日，四川綿陽一名患者的樣本經(jīng)核酸檢測并通過復(fù)核，確診為陽性，綿陽新增一例新冠肺炎確診病例。

那么，面對新型冠狀病毒，核酸檢測陽性報告是如何出爐的呢?近日，成都商報-紅星新聞記者走進(jìn)四川綿陽市404醫(yī)院檢驗科，獨(dú)家揭秘核酸檢測全過程。從2月1日開始，該醫(yī)院成為了綿陽市可開展新冠病毒核酸檢測確診的實驗室。

從接收樣本開始，這群離新型冠狀病毒最近的“隱形戰(zhàn)士”，都是三級防護(hù)，他們需要對樣本滅活，核酸提取、擴(kuò)增等，然后對結(jié)果進(jìn)行分析，并最終出報告，這個過程要持續(xù)6個小時。如果檢測結(jié)果為“陽性”，則需要更換試劑再次重復(fù)操作一次，進(jìn)行復(fù)核。也就是說，一份新冠核酸陽性報告出爐，至少需要12小時。

整個操作中，他們直面“新冠病毒”，特別是在安全柜內(nèi)打開樣本蓋子提取核酸時，需要講究手法，需要輕輕地、溫柔地打開蓋子，一不小心就可能形成氣溶膠，污染安全柜，也可能讓其他樣本交叉感染，形成“假陽性”。

接收樣本

安全柜內(nèi)打開轉(zhuǎn)運(yùn)箱

3層密封，每打開一層都要消毒

2月10日下午3時許，綿陽市404醫(yī)院檢驗科醫(yī)生張旭和同事陳孝剛來到“新冠核酸檢測實驗室”的“樣本處理區(qū)”，用75%乙醇對實驗室內(nèi)的生物安全柜的空間和臺面以及核酸提取儀進(jìn)行消毒。實驗室內(nèi)擺放著多個儀器，一旦他們開始實驗，就要等到實驗結(jié)束才能出來，而消毒是每次進(jìn)行新冠病毒核酸檢測前都必須做的準(zhǔn)備工作。

消毒完成，張旭和陳孝剛互相幫忙，穿著防護(hù)衣、護(hù)目鏡、隔離衣，并戴上N95口罩、雙層手套，套上腳套等，按照三級防護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)穿戴好，進(jìn)入實驗室，對送到的裝有90多份標(biāo)本的轉(zhuǎn)運(yùn)箱進(jìn)行消毒，然后將標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)箱放入生物安全柜。

成都商報-紅星新聞記者看到，生物安全柜高兩米多，上半部分是密封的，外表上貼著“新型冠狀病毒核酸檢測”幾個字，下半部分有一塊玻璃，打開玻璃，里面就可以放置樣本。

隨后，張旭和陳孝剛坐在生物安全柜前，雙手伸進(jìn)柜里，慢慢打開標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)箱。因為轉(zhuǎn)運(yùn)箱是密封的，他們一人開箱，一人用75%乙醇進(jìn)行消毒。“轉(zhuǎn)運(yùn)箱共有3層密封，每打開一層就要進(jìn)行消毒，還要檢查是否密封好。”張旭說。

病毒滅活

56℃水浴30分鐘，靜置20分鐘

降低開蓋導(dǎo)致的氣溶膠污染

樣本為何要在生物安全柜內(nèi)內(nèi)取出呢?這個生物安全柜到底起到什么作用?張旭介紹，生物安全柜在運(yùn)行時，可以將柜內(nèi)空氣向外抽吸，使柜內(nèi)保持負(fù)壓狀態(tài)，通過垂直氣流來保護(hù)工作人員;外界空氣經(jīng)高效空氣過濾器過濾后進(jìn)入安全柜內(nèi)，以避免樣品被污染;柜內(nèi)的空氣也經(jīng)過過濾器的過濾后再排到大氣中，以保護(hù)操作者和實驗室環(huán)境。

張旭和陳孝剛?cè)〕鲛D(zhuǎn)運(yùn)箱中的樣本后，在生物安全柜內(nèi)用75%乙醇對裝有標(biāo)本的密封袋進(jìn)行噴灑消毒，用吸水紙擦拭后，又小心地將樣本拿到實驗室內(nèi)另外一種名叫“水浴箱”的儀器內(nèi)，放置在水浴箱中的試管架上。

“在放入樣本前，我們已提前將水浴箱預(yù)熱至56℃，這個過程叫做‘病毒滅活’。”張旭告訴記者，病毒滅活是非常重要的一步，可以在不影響檢測結(jié)果的情況下，確保檢測人員安全，病毒滅活后，操作人員感染風(fēng)險會大大降低。

一個簡單的將病毒放入水浴箱的操作，張旭的護(hù)目鏡上已經(jīng)蒙上了一層水霧。在等待病毒滅活的時間里，張旭和陳孝剛聊著當(dāng)天看到的手機(jī)新聞，幾乎都是有關(guān)疫情的。而他們的聊天，因為穿著防護(hù)服，必須大聲說話，但為了防止口渴喝水上廁所，他們又只能少說話，多數(shù)時候坐在凳子上，看著時間。

樣本滅活時間為30分鐘，滅活之后，需常溫靜置20分鐘，以防高溫開蓋導(dǎo)致的氣溶膠污染實驗室和人員。

提取核酸

開蓋要溫柔，還要講究手法

一不小心就可能形成氣溶膠

“蒲老師，我們需要試劑了!”陳孝剛拿出對講機(jī)喊道。“收到!”蒲琴在另一區(qū)域用對講機(jī)回答。蒲琴在實驗室的“制劑準(zhǔn)備區(qū)”，在張旭和陳孝剛進(jìn)行病毒滅活等工作時，蒲琴也沒有閑著，身著二級防護(hù)裝備的她，一直在進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增體系的配制。

而蒲琴所在區(qū)域與張旭、陳孝剛所在的核酸提取區(qū)僅由一個傳遞窗交流，傳遞窗像是一種雙層門，一個區(qū)域的門打開時，另一個區(qū)域的門則無法打開。當(dāng)收到陳孝剛發(fā)出的消息后，蒲琴打開傳遞窗門，將試劑放在傳遞窗，然后關(guān)上門，用對講機(jī)通知陳孝剛。這時，陳孝剛又打開門，拿出試劑。“我們兩個區(qū)域挨著，不過是完全隔離開的，防止污染其他區(qū)域。”陳孝剛說。

待樣本滅活靜置后，張旭和陳孝剛兩人再次坐在生物安全柜前，雙手分別伸進(jìn)安全柜，開始配合操作，一人拿樣本，一人編號。隨后，張旭拿出一個樣本采集管，非常溫柔地打開蓋子，用專業(yè)儀器吸取一定量的樣本，然后陳孝剛進(jìn)行配合，加入核酸提取試劑，提取完成后，立即將提取物進(jìn)行封蓋處理。

“加入核酸提取試劑，就是把病毒細(xì)胞破壞，讓核酸釋放出來。”陳孝剛說，兩人配合操作，可以互相監(jiān)督試劑是否加錯、防護(hù)裝備是否破損，還可以加快提取核酸的效率。在張旭和陳孝剛看來，提取核酸這一步，是最危險的一個操作步驟。張旭告訴記者，打開樣本采集管的蓋子，必須要輕輕地、非常溫柔，有時還要講究手法，比如什么時候一只手開蓋，什么時候兩只手配合開蓋，都需要做到心中有數(shù)。“如果開蓋的力度大了，很可能就會形成氣溶膠，這樣會污染生物安全柜，也會污染手套，甚至有可能讓安全柜內(nèi)的樣本交叉感染，形成‘假陽性’。”張旭說。

報告出爐

檢測結(jié)果如果是陽性

需換試劑再重復(fù)一次操作

90多份樣本，張旭和陳孝剛在提取完核酸后，在生物安全柜內(nèi)將提取核酸加至PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中，花了差不多近3個小時。“蒲老師，核酸提取完了。”陳孝剛再次用對講機(jī)喊。“好的。”蒲琴用對講機(jī)回答。蒲琴來到實驗室的“擴(kuò)增區(qū)”，該區(qū)域同樣和“樣本處理區(qū)”緊挨著，“樣本處理區(qū)”位于實驗室三個區(qū)域的中間。同樣，蒲琴通過傳遞窗拿到了構(gòu)建好的擴(kuò)增體系準(zhǔn)備上機(jī)。

隨后，蒲琴將擴(kuò)增體系放入擴(kuò)增儀，核對擴(kuò)增程序是否與試劑說明書相符，啟動擴(kuò)增程序，待反應(yīng)開始后離開實驗室。“這就是對提取的核酸進(jìn)行分析，等著出報告就行。”蒲琴告訴記者。

當(dāng)天晚上10時左右，經(jīng)過6個小時的程序，報告出來了，其中一份報告顯示核酸檢測結(jié)果為“陽性”。看到這一份報告，張旭、陳孝剛、蒲琴三人心中有些不是滋味。他們隨即報告給院感科和感染科主任，醫(yī)院用負(fù)壓車將病人轉(zhuǎn)運(yùn)到分院隔離治療。

當(dāng)天晚上的實驗完成，蒲琴將擴(kuò)增后產(chǎn)物用一次性醫(yī)療垃圾袋裝好扎緊，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增產(chǎn)物廢物處理區(qū)。張旭和陳孝剛又對實驗室進(jìn)行了桌面和儀器的擦拭消毒、拖地徹底消毒，空氣紫外線照射等。第二天早上上班時，張旭等人換了一種試劑，再次對頭天晚上檢測到的陽性樣本進(jìn)行復(fù)核，結(jié)果仍然是陽性。他們再次報告隔離患者的主治醫(yī)生，以及院感染科。

12日，綿陽市404醫(yī)院檢驗科主任鄧建軍告訴記者的，一份報告出爐需要6小時，如果某份是陽性，則需要更換試劑再進(jìn)行復(fù)核檢測，整個流程和第一次一樣，重復(fù)操作一次，又需要6個小時。

人物故事

三個小組每天輪班

年齡最小的今年才30歲

直面病毒的 “隱形戰(zhàn)士”

張旭、陳孝剛、蒲琴，他們?nèi)耸且粋€核酸檢測小組，和他們一樣的還有兩個小組。三個小組，每天2-3班倒。鄧建軍介紹，從2月1日開始，該醫(yī)院順利通過驗收，成為了綿陽市可以開展新冠病毒核酸檢測確診的實驗室。“進(jìn)行核酸檢測的有9個人，7男2女，每天和病毒劍鋒相對，近身搏斗，就是為了識別出新冠病毒的真面目，他們都是‘隱形戰(zhàn)士’。”鄧建軍說。

張旭是他們組年齡最小的，今年30歲。2月1日剛剛開始進(jìn)行核酸檢測時，就出現(xiàn)了一例陽性，他的心里也有些擔(dān)心。“說不擔(dān)心不可能，雖然我們防護(hù)很到位，但畢竟是和新冠病毒近距離接觸。剛開始那兩天，我回到家中，都不敢抱兩歲的孩子，害怕有風(fēng)險;而晚上也很難睡著，閉上眼就是白天的檢測經(jīng)過。”張旭說，不過，經(jīng)過十多天的工作，整個操作流程更加順暢了，他也從心理上克服了這種擔(dān)心。

陳孝剛也只有31歲，對他來說，工作時穿防護(hù)服才是一種考驗。他告訴記者，每次進(jìn)實驗室，除了防護(hù)衣外，他上身就穿了一件秋衣，但即使如此，幾分鐘后就會出汗，而且護(hù)目鏡也會出現(xiàn)水霧，渾身很難受。

“他們同樣是這場抗擊疫情戰(zhàn)斗的主角，更是一個離新型冠狀病毒最近的團(tuán)隊，發(fā)揮了至關(guān)重要的‘識別者’的作用，讓新型冠狀病毒‘無處可躲’!”鄧建軍說。

關(guān)鍵詞： 核酸檢測